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本生阐述:牛血清白蛋白的应用

发布时间:2021-04-27    点击次数:257

  本生阐述:牛血清白蛋白的应用

  牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有广泛的应用, 例如在WB实验中加入BSA, 通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,减轻不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的。具体的WB实验操作和BSA在实验中的应用分享如下

  方法/步骤

  测定蛋白浓度

  按50:1配置BCA工作液。10ulC液(蛋白标准)+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。再分别以0、1、2、4、8、12、16、20ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中,在其他样品孔中加入10ul待测样品。分别加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室温放置2小时。用酶标仪测定蛋白浓度:测定A562,依标准曲线算出蛋白浓度。

  SDS-PAGE电泳

  1 制 胶: 按比例配制分离胶,缓缓地摇动溶液,使激活剂混合均匀,将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中,再在液面上小心注入一层水,以阻止氧气进入凝胶溶液中,静置40min。同前按比例配制浓缩胶,但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分,连续平稳的注入凝胶溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡,静制60min以上以保证完全聚合。

  2 预电泳: 将聚合好的凝胶安置于电泳槽中,小心拔去梳子,加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min。(目的是清除凝胶内的杂质, 疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通)。

  3 样品准备:首先计算上样体积,然后按样品:上样buffer=4:1的比例加入上样bufer混匀,沸水煮10分钟,冰上5分钟。

  4 加 样: 预电泳后依次加入标准品(Marker)和待分析样品。(加样时间要尽量短,以免样品扩散,可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。每个泳道加5ul 。

  5 电 泳: 加样完毕,选择80V恒压进行电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处(一般约20分钟),更换至100V恒压电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处,即停止电泳(一般约为1小时20分钟)。

  膜的封闭

  用TBST液洗涤印迹膜10分钟x2次。放入5%BSA(abs49001012)封闭液内,摇床震动,70转/分钟,室温封闭1小时30分钟。

  蛋白质的样品制备

  取心肌组织50mg,待组织块自行溶解,用滤纸吸去其表面水分,将组织块放入玻璃匀浆器球状部位,用组织剪尽量将其剪碎,将剪碎的心肌组织放入玻璃匀浆器的杆状部,按1mlRIPA+10ulPMSF/100mg心肌组织的比例加入RIPA和PMSF(先加RIPA再加PMSF),将玻璃匀浆器插入冰中,匀浆约30分钟。

  将心肌组织匀浆转移到离心管中,4℃12000g离心5分钟,收集上清(如有粘稠物进一步用超声处理),样品分装冻存于-20℃备用。

  本生阐述:牛血清白蛋白的应用,先和大家介绍到这,如果想要了解更多血清白蛋白的信息,可以关注天津本生生物,专业给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材,欢迎广大客户来询。

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