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天津本生-大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒

发布时间:2021-08-19    点击次数:105

  大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒仅供研究使用—天津本生

  大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒实验目的

  本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠髓过氧化物酶(MPO)的含量。

  有效期:6个月

  保存条件:2-8℃

  实验原理

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠髓过氧化物酶(MPO)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠髓过氧化物酶(MPO)呈正相关。用酶标仪在450nm  波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

  大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒组成

  试剂盒组成96孔配置48孔配置备注

  微孔酶标板8孔×12条8孔×6条 无

  标准品0.3mL×6管0.3mL×6管无

  样本稀释液6mL3mL无

  检测抗体-HRP10mL5mL无

  20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

  底物A6mL3mL无

  底物B6mL3mL无

  终止液6mL3mL无

  封板膜2张2张无

  说明书1份1份无

  自封袋1个1个无

  备注:

  1. 标准品浓度依次为:480、240、120、60、30、0 U/L

  2.  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

  样本处理及要求

  1.  血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C  1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  注:标本溶血会影响检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

  需要而未提供的试剂和器材

  1. 酶标仪(450nm)

  2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3. 37℃恒温箱

  4. 蒸馏水或去离子水

  试剂准备

  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

  操作步骤

  1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

  注意事项

  1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以准确结果。所有试剂都必须在使用达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

  2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

  3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

  4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

  5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

  6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

  7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

  8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

  9. 不能使用过期产品。

  10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

  洗板方法

  手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。根据需要,重复此过程数次。

  自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

  实验结果计算

  以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

  大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒性能

  1. 检测范围:15 U/L – 480 U/L。

  2. 灵敏度:检测浓度小于1.0 U/L。

  3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

  4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

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