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大鼠白介素1β ELISA试剂盒操作步骤

发布时间:2021-09-14    点击次数:351
大鼠白介素1β ELISA试剂盒操作步骤
1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
40 ng/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
20 ng/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
10 ng/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
5 ng/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
2.5 ng/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
 
 
2.    加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.         温育:操作同3。
8.         洗涤:操作同5。
9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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