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牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒使用说明书

发布时间:2021-09-16    点击次数:101

本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。


牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒使用说明书


牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒 试剂盒名称】

牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒

牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒 试剂盒用途】

定量血清、血浆及相关液体样本中血管紧张素II(AngII)的含量

牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒检测原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被血管紧张素II(AngII)透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中血管紧张素II(AngII)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中血管紧张素II(AngII)含量。

牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒 试剂盒组成】

1
酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL
2
标准品:200ng/ml0.6mL8底物夜B6mL
3
20倍浓缩洗涤液20mL9终止液6mL
4
标准品稀释液6mL10说明书1份
5
样本稀释液6mL11封板膜1张
6
酶标试剂6mL12密封袋1个

备注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml


牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒需要而未提供的试剂和器材】

1、37℃恒温箱

  1. 标准规格酶标仪

  2. 精密移液器及一次性吸头

  3. 蒸馏水

  4. 一次性试管

  5. 吸水纸

牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒操作步骤】

1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。

2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。

7、温育:重复4的操作。

8、洗板:重复5的操作。

9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。

10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒 样本要求】

1、样本不能含叠氮钠(NaN3,因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。

牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。

4、牢记样本已经稀释5倍,计算结果乘以5才是样本实际浓度。

5、本试剂盒定量范围为0.1-200ng/ml,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(0.1-200ng/ml范围内),乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。

6、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。

7、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。

8、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。

9、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。


牛血管紧张素II(AngII)ELISA试剂盒操作程序总结】

天津本生 试剂盒 ELISA检测试剂盒


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