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细胞培养的步骤及注意事项!

发布时间:2021-09-24    点击次数:343

  细胞培养的步骤及注意事项!

  一、 复苏

  1. 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

  2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。

  3. 把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。

  4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。

  5. 3天换一次培养基。

  二、 传代

  1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

  2. 把原有培养基吸掉。

  3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。

  4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

  5. 用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。

  6. 把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。

  7. 倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。

  8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。继续培养。

  三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃  30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。 冻存液的配制: 70%的培养基+20%FBS+10%DMSO.  DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。

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