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大家来了解下,细胞冻存的注意事项!

发布时间:2022-07-19    点击次数:479

  大家来了解下,细胞冻存的注意事项!

 

  细胞冻存是利用细胞冻存管,将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,起到了细胞保种的作用。不妨来看看BUNSEN本生小编的详解:

  细胞冻存与复苏:

  一般来说,细胞进行转移,最佳的策略是进行低温保存,而细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均已停止,即代谢处于*停止状态,故而可以长期保存

  1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但为对数生长期细胞。在冻存前天尽量换培养液;

  2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;

  3、冻存和复苏尽量用新配制的培养液。

  细胞冻存:

  目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由冰晶形成的细胞损伤。

  1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。

  2、取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。

  3、离心1000 rpm,5 min.

  4、去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml.

  5、 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。

  6、 冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;当温度达到-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

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