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本生阐述:ELISA试剂盒该如何操作及怎么计算

更新时间:2023-01-09    点击次数:767

  本生阐述:ELISA试剂盒该如何操作及怎么计算


  ELISA试剂盒操作步骤

  1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

  8. 操作过程中除了按照步骤来操作,我们还需要额外准备酶标仪(450nm),高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL,37℃恒温箱以及蒸馏水或去离子水。

  9. 要注意试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

  ELISA试剂盒实验结果计算

  以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。


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