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过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒说明书

更新时间:2023-02-22    点击次数:1341

过氧化物酶(PeroxidasePOD)试剂盒说明书

微量法100/96

正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

测定原理:

POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。

组成:

产品名称

SR007-100T/96S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

25ml

4℃

试剂二:液体

100μl

4℃

试剂三:液体

100μl

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至470nm,蒸馏水调零。

2、 工作液的配制:临用将试剂一、试剂二、试剂三按照2.6(ml):1.5(μl):1(μl)的比例混匀;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min以上;现配现用。

3、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本和190μl工作液,混匀,记录470nm下1min时吸光值A1和2min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

注意:

如果ΔA小于0.005,可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。

POD活性计算:

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)POD活性

单位定义:每ml血清(浆)在每ml反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

计算公式:

POD(U/ml)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =2000×ΔA

2、组织、细菌或细胞POD活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每ml反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织在每ml反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

POD(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞在每ml反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =4×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.2ml; V样:加入样本体积,0.01ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。

96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)POD活性

单位定义:每ml血清(浆)在每ml反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/ml)=ΔA×V反总÷V样÷0.005÷T =4000×ΔA

2、组织、细菌或细胞POD活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每ml反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织在每ml反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞在每ml反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =8×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.2ml; V样:加入样本体积,0.01ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。

过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒说明书2023已更新报价本生生物公司供应:荧光定量PCR耗材,细胞培养类,核酸提取耗材,试剂包装类,生物试剂,色素,原料,抗原抗体,试剂盒等,通用耗材包括深孔板、96孔硅胶垫、吸头、封板膜、玻片、试管、量杯、试剂槽、离心管、移液器等。


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