必知干货——酶标板的选购要注意哪些方面

　　必知干货——酶标板的选购要注意哪些方面
 

　　在酶联免疫吸附试验中, 参与免疫学反应的抗原、抗体、标记抗体或抗原的纯度、浓度和比例;缓冲液种类、浓度和离子强度、pH值和反应温度、时间等条件起着关键作用。此外,作为载体的固相聚苯乙烯表面对抗原、抗体或抗原抗体复合物的吸附也起着重要作用。

　　酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板，一般不用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，需要更高的要求和特定的酶标工作液。

　　一：根据酶标板底部的不同，可以分为平底、U型底、V型底

　　平底的折射率低，适于在酶标仪检测;U型底的酶标板折射率较高，方便加样、吸样、混匀等操作，可以不用放在酶标仪上，直接通过目测观察颜色变化情况，从而判定有无相应的免疫反应。V底的酶标板可以精确的吸取样品。

　　二：根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同，分为高结合力、中结合力和氨基化

　　高结合力：表面经处理后，其蛋白结合能力大大增强，可达300~400ngIgG/cm2，主要结合的蛋白分子量>10kD。使用该类酶标板可提高敏感性，并可相对减少包被蛋白的浓度和用量，不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后，以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位，需使用蛋白作为封闭剂。

　　中结合力：经表面疏水键被动与蛋白结合，适合作为分子量>20kD的大分子蛋白的固相载体，其蛋白结合能力为200~300ng IgG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性，适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体，可降低潜在的非特异性交叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。

　　氨基化：经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基，其疏水键由亲水键取代。该类酶标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和pH值，其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。由于其表面的亲水特性和可通过其它交联剂共价结合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污剂的蛋白分子。该类板的缺陷为由于降低了疏水性，一部分蛋白分子无法结合;此外，其表面需有效地封闭。由于亲水和共价的表面特性，使用的封闭液必须能够与非反应性氨基基团和所选择的交联剂中任何功能基团发生作用。

　　三：根据颜色分为透明、黑色、白色

　　透明的是常用的，用于最一般的酶联免疫实验。相对于透明的的板子，还有用于发光检测用的不透明的板子，一般有黑色和白色两种。黑色的酶标板自身会有光吸收，所以它的信号相对于白色的板子要低很多，因此一般用于检测较强的光，如荧光检测。而白色的酶标板就用于较弱的光检测，常用于一般的化学发光。另外黑色的酶标板还可以消弱非特异反应带来的问题。有些客户会问，用一般的酶标板可不可以进行发光检测，回答是不可以的，因为一般从化学发光反应中发射出的光是各向同性的，也就是说各个方向上同等发射出来的。如果用透明的板子，光不仅会从垂直方向发散，还从水平方向发散出来。很容易的就会通过各个孔之间的间隙和孔壁。这样的话，光较强时相邻孔之间的影响就会很大，因此不能用透明的酶标板来进行化学发光实验。

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