ELISA检测中TGF-β1样本处理方法简介

　　ELISA检测中TGF-β1样本处理方法简介

　　近段时间以来，很多客户来电询问关于TGF-β1样本的处理方法，为了更好的让客户了解整个过程，BUNSEN本生整理以供参考。

　　由于机体内表达的 TGF-β1是无活性同型二聚体的前体分子，在机体外，无活性的TGF-β1又称为latency associated peptide (LAP)，在酸性条件下进行预处理即可获得有活性的TGF-β1，从而用于ELISA检测。

　　TGF-β1血清、血浆样本的活化处理步骤

　　1、 取40 μL样本，加入2 mL EP管或者西林瓶中。

　　2、 加入20 μL 1N HCl于涡旋仪上混合均匀，室温静置10 min

　　3、 加入20 μL 1N NaOH, 混匀。

　　4、 根据样本实际情况，对样本进行适当稀释后进行检测。

　　注：样本测值计算时应乘以总体稀释倍数(含活化稀释和活化后稀释)

　　TGF-β1细胞上清/尿液样本的活化处理步骤

　　1、 取100 μL细胞培养上清或尿液， 加入20 μL 1N HCl于涡旋仪上混合均匀

　　2、 室温静置10 min

　　3、 加入20 μL 1N NaOH, 混匀后即可进行检测

　　提醒：以上两个步骤中活化了的样本需在2h内完成检测才能保证实验结果的准确性。细胞培养基中的动物血清可能含有一定浓度的TGF-β1，因此在检测细胞培养上清时，尽量选择不含有动物血清的细胞培养基。如若使用了含有动物血清的细胞培养基，务必将细胞培养基作为对照进行检测，确定培养基中TGF-β1的浓度，最终在计算细胞培养上清中的TGF-β1浓度时减去培养基中TGF-β1的浓度方为实际样本浓度

　　活化试剂的配制：

　　1、 1 N HCl (100mL): 将 8.33mL 的 12M HCl缓慢加入到 91.67mL 的去离子水中，混合均匀后即可使用。

　　2、 1N NaOH/0.5M HEPES (100mL)：将 10mL浓度为10M NaOH加入80mL的去离子水中，混合均匀后再加入 11.9g 的 HEPES，混匀，用去离子水定容至100mL备用.

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