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ELISA实验中需注意事项及操作步骤!

更新时间:2023-06-29    点击次数:3178
  ELISA实验中需注意事项及操作步骤!
 
  ELISA试剂盒实验中出现各种问题,如果能提前知道一些关于elisa实验的要领就可以正确的避免这些问题的出现,BUNSEN本生总结问题:
 
  1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。
 
  2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
 
  3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
 
  4、ELISA试剂盒实验时,要使底物避光保存。
 
  5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
 
  6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
 
  7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
 
  8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
 
  9、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
 
  10、ELISA试剂盒对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
 
  在ELISA试剂盒中通常有3次加样步聚,即加标本,加酶物,加底物。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行溅起,不行发作气泡。加标本通常用微量加样器,按规则的量参加板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以发作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加样。
 
  有此测定(如间接法ELISA)需用稀的血清,可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参加稀释液,再在其参加血清标本,然后在微型震动器上震动1分钟以保证混和。加酶物使用液和底物用液时可用定量多道加液器,使加液进程迅速完结。在双抗体夹心法测定抗原时,如使用对于抗原分子上两个不一样抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体。
 
  ELISA试剂盒则在测守时可使标本的参加和酶标抗体的参加两步并作一步。这种双位点一步不光简化了操作,缩短了反应时间,如使用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也明显进步。单克隆抗体的使用使测定抗原的ELISA试剂盒进步到新水平。
 
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