欢迎来到本生(天津)健康科技有限公司网站!
网站导航
技术文章
当前位置:主页 > 技术文章 >ELISA操作要点:ELISA加样技巧您了解多少!

ELISA操作要点:ELISA加样技巧您了解多少!

更新时间:2023-07-05    点击次数:1138

  ELISA操作要点:ELISA加样技巧您了解多少!


  那在ELISA实验中,加样 一定是绕不开的一环!ELISA测定操作非常简单,一般涉及到样本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响测定结果,且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。

  ELISA实验中一般需要 4 次加样,即加样本、加检测抗体、加底物和加终止液。

  ● 实验室使用的微量加样器应注意保养并定期校正。ELISA比较敏感,每孔加入液体量误差会导致最后读数差别,因此避免仪器带来误差。

  ● 加样前,溶液充分混匀,加样时不可90度向孔中滴加液体,否则会导致液体残留在吸头上,加样不准确。正确加样方法应为45度,吸头贴着孔壁和液面的交界处加入。

  ● 加样品时,单孔用量要求:≥50ul/指标,如需要做复孔则所需样本量≥100ul/指标。如果样本量不充足,具体用量可咨询您的专属销售。

  ● 加样时速度不可过快,否则无法保证微量加样的准确性和均一性。

  ● 加样时避免液体溅出,如有样本溅出,应用吸水纸轻轻拭干,并做相应记录。

  ● 每次加样顺序一致,尤其底物、终止液顺序一致,保证每个孔显色时间相同。

  ● 加完显色液后,放入一个可推拉的抽屉内,就可以避光振荡了。


638229376887152132777.png


  加样防错小窍门

  ● 用一张写满字的纸,字越多越好,比如报纸,垫在下面,这样,加过标本的小孔看过去下面的字会变小,没加的字正常,非常容易区分。

  ● 可以利用液面反光与没有加的孔加以区别。

  (以下问题可能因多种原因引起,本文仅讨论加样的解决方法)

  Q: 同一个样本间的各个复孔的读数有显著性差异?

  A: 加样量多少不一,操作时间长短不一。重复同一样本时,加样量与加样时间理应相同,同时也应注意移液器的校准。加样后可轻微晃动酶标板使反应液充分混合。

  Q: 阳性对照读数不正常?

  A: 加样量不正确。应保持每次加样的步骤不要有太大的差异,有条件的应该考虑使用排枪。

  Q: 血清本底高?

  A: 加样时使用同一枪头、交叉污染。每次吸样注意更换吸头,做到一样一吸头,避免交叉污染。

  Q: 实验的标准曲线和测定的重复性差?

  A: 1. 可能原因:加样本及试剂量不准;孔间不一致;校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密;重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近;重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性;样品稀释前应充分混匀。

  2. 可能原因:加样过快,孔间发生污染;重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性;加样不要过快。

  3. 可能原因:加错样本;检查记录和试剂,是否加错样本。

  4. 可能原因:加样本及试剂时,加在孔壁上部非包被区;加样枪头不要贴壁。

  ELISA试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。


如果您有任何问题,请跟我们联系!

联系我们

版权所有©2024 本生(天津)健康科技有限公司 备案号:津ICP备19006588号-2 sitemap.xml 技术支持:制药网 管理登陆

地址:天津市武清开发区创业总部基地五号楼

在线咨询 联系方式 二维码

服务热线

15502280048

扫一扫,关注我们