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Elisa实验:双抗夹心法、间接法、竞争法优缺点对比

更新时间:2023-07-17    点击次数:3071

  Elisa实验:双抗夹心法、间接法、竞争法优缺点对比


  优点:

  双抗夹心法:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化,孵育2次,操作简单,减少人为因素的影响,可靠的特异性。

  间接法:二抗可以加强信号,而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。

  竞争法:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。

  竞争法 此法可用于抗原及半抗原的定量测定,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将特异性抗体吸附于固相载体上,加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原,使二者竞争地与固相抗体结合,经过洗涤分离,zui后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。

  缺点:

  双抗夹心法:缺少链霉亲和素的抗体,起不到型号放大作用,而且抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

  间接法:要经过三次孵育,操作步骤繁琐,稍微不注意会导致操作误差,交互反应发生的机率较高。间接法 此法是检测抗体常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上,加入待测血清(抗体)与之结合,洗涤后,加酶标抗体和底物进行测定。


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  竞争法:竞争法对于手法要求非常高,整体的敏感性和专一性都较差。

  双抗体夹心法测抗原:双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法,适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。

  双抗原夹心法测抗体:反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。

  间接法:是检测抗体zui常用的方法,本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。

  竞争法测抗体:当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。抗HBe的检测一般采用此法。

  竞争法测抗原:小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

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