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BUNSEN本生:elisa检测试剂盒组成技术原理

更新时间:2023-08-11    点击次数:1061

  BUNSEN本生:elisa检测试剂盒组成技术原理


  试验原理

  elisa检测试剂盒试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

  组成结构:

  1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

  2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

  3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

  4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。

  5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。


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  安全性:

  1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

  2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

  3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

  4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

  5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

  6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

  7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

  8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

  9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

  10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

  11. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

  12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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