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人活性氧 (ROS) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书

更新时间:2023-09-11    点击次数:1478

活性氧 (ROS) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书


  本试剂盒仅供研究使用。


检测范围:0.3ng/mL - 8ng/mL


  规格:96T  48T 

  货号:BS-9689-A   BS-9689-B


使用目的:

本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中活性氧 (ROS) 含量。

验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人活性氧(ROS)水平。用纯化的人活性氧(ROS) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入活性氧 (ROS),再与 HRP  标记的活性氧 (ROS) 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的活性氧 (ROS) 呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度 (OD  ),通过标准曲线计算样品中人活性氧 (ROS) 浓度

试剂盒组成:

1

30 倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

标试剂

6ml×1

8

准品 (16ng/mL)

0.5ml×1

3

标包被板

12 孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

显色剂 B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求:

1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 (HRP) 活性

操作步骤:

1.     标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

8ng/mL

5 号标准品

150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

4ng/mL

4 号标准品

150μl 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2ng/mL

3 号标准品

150μl 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

1ng/mL

2 号标准品

150μl 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

0.5ng/mL

1 号标准品

150μl 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2.     加样:分别设空白孔 (空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl


然后再加待测样品 10μl  (样品最终稀释度为 5 ) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.     温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.     配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.    洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

6.     加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。

7.     温育:操作同 3

8.     洗涤:操作同 5

9.     显色:每孔先加入显色剂 A50μl ,再加入显色剂 B50μl ,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10.   终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应 (此时蓝色立转黄色)。

11.   测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度 (OD ) 。  测定应在终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结

操作程序总结:.png


计算:

标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,为样品的实际浓度。

注意事项

1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。

     2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果

3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高 (样本 OD 大于标准品孔第一孔的OD ),请先用样品稀释液稀释一定倍数 (n ) 后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数 ( ×n×5)。

    5  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染

    6 .底物请避光保存。

   7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

   8 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9 .本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1 .试剂盒保存:;2-8℃。

2 .有效期:6 个月

   人活性氧 (ROS) 酶联免疫分析试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。


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