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BUNSEN本生:酶标板如何处理,增加抗体结合能力?

更新时间:2023-09-14    点击次数:719

  BUNSEN本生:酶标板如何处理,增加抗体结合能力?


  根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同可以将酶标板分为以下几类:

  1 高结合力酶标板:

  酶标板经表面处理后蛋白结合能力大大增强,可达300~400ng IgG/cm2,主要结合的蛋白分子量>10kD。使用该类酶标板可提高敏感性,并可相对减少包被蛋白的浓度和用量,不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后,以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位,需使用蛋白作为封闭剂。


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  2、中结合力酶标板:

  酶标板经表面疏水键被动与蛋白结合,适合作为分子量>20kD的大分子蛋白的固相载体,其蛋白结合能力为200~300ng IgG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性,适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体,可降低潜在的非特异性交叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。

  3、氨基化酶标板:

  酶标板经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基,其疏水键由亲水键取代。该类酶标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和pH值,其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。由于其表面的亲水特性和可通过其它交联剂共价结合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污剂的蛋白分子。该类板的缺陷为由于降低了疏水性,一部分蛋白分子无法结合;此外,其表面需有效地封闭。由于亲水和共价的表面特性,使用的封闭液必须能够与非反应性氨基基团和所选择的交联剂中任何功能基团发生作用。

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