BUNSEN本生：ELISA试剂盒应用及实验前需做准备

　　BUNSEN本生：ELISA试剂盒应用及实验前需做准备
 

　　ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。

　　ELISA试剂盒试剂特点——Elisa试验敏感性高，特异性强，重复性好。

　　ELISA试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素。

　　ELISA试剂盒ELISA原理——ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙x微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

　　ELISA试剂盒检测前准备工作：

　　1. 仔细阅读说明书，确定试剂盒在有效期内。

　　2. 按说明书确定所有试剂是否齐全，完整的沪鼎ELISA试剂盒包含30倍浓缩洗涤液, 酶标试剂,酶标包被板,样品稀释液,显色剂A液,显色剂B液,终止液,标准品,标准品稀释液,说明书,封板膜,密封袋等12个组成部分。另外要确认试剂盒以外的材料是否齐全，如酶标仪、移液器及吸头、加样槽、蒸馏水或去离子水、洗瓶或者自动洗板机、37°C水浴锅或恒温箱、EP管、稀释用聚丙烯试管、无粉一次性乳胶手套等。

　　3. 实验前，将试剂盒从冰箱中取出，室温放置半个小时，以让试剂恢复到室温。

　　4. 将10×的检测缓冲液(Assay Buffer)稀释到1×，吸取10X浓缩Assay buffer 5mL至50mL离心管，加蒸馏水至 50Ml，震荡混匀备用。1×Assay buffer主要用于检测抗体、HRP等浓缩液的稀释。

　　5. 将20×的洗涤液稀释到1×，吸取20X洗液50mL至1L量筒，加蒸馏水至1000Ml，混匀，转移至干净容器内备用，洗涤液用于实验中的洗涤步骤。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用37℃水浴微加热使结晶wan全溶解后再配制洗涤液，(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。

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