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辅酶F420(F420)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

更新时间:2024-02-19    点击次数:602

  辅酶F420(F420)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

 

  本试剂盒仅供研究使用。

  检测范围:

  96T

  1.2 ng/L -50ng/L

  使用目的:

  本试剂盒用于测定微生物样本中辅酶 F420(F420)含量。

  实验原理

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中辅酶  F420(F420)水平。用纯化的辅酶 F420(F420)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入辅酶  F420(F420),再与 HRP 标记的辅酶 F420(F420)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物 TMB  显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的辅酶  F420(F420)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中辅酶 F420(F420)浓度。

  试剂盒组成

  标本要求

  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步骤

  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样  50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5  倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

  4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 后弃去,如此重复 5 次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

  7. 温育:操作同 3。

  8. 洗涤:操作同 5。

  9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

  10 分钟.

  10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

  操作程序总结:

  计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD  值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD  值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  注意事项

  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6.底物请避光保存。

  7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

  9.本试剂不同批号组分不得混用。

  保存条件及有效期

  1.试剂盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6 个月

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