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BUNSEN讲解:超滤离心管知识问答

更新时间:2024-02-27    点击次数:676

  BUNSEN讲解:超滤离心管知识问答


  1、问:超滤管的主要用途?

  答:浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株DNA/RNA样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物样本。

  2、问:如何选择合适的超滤管?

  答:通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。

  3、问:超滤管对那些化学物质具有耐受性?

  答:适用于生物液体及水溶液样本,具体的一些化学试剂的相容性,详见说明书。

  4、问:超滤管主要有什么组成?

  答:括一个盖子、一个过滤器和一个离心管

  5、问:超滤管需要预处理吗?

  答:新买的超滤管是干燥的并且含有微量甘油。可用缓冲液或Millipore水预清洗。如果干扰仍然存在,用0.1 N NaOH清洗,然后用缓冲液或Millipore水再次清洗后甩干。

  6、问:超滤管可以重复使用吗?

  7、答:可以,一般也就用一两次就换新的,先用缓冲液洗涤,再用去离子水反复洗涤。残留蛋白杂质多时,可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗,去除和溶解蛋白质及其他杂质的。然后将超滤离心管的超滤膜泡在叠氮钠溶液或20%的乙醇溶液中,防止长菌,而且防干,一旦润湿后应避免重新干燥,在干燥会影响滤膜的孔径。

  注意:不可以用超声洗涤!清洗过程枪头一定不能碰到滤膜。

  8、问:如何达到转速和离心的平衡?

  答:质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至低档,减小对膜的压力。

  注意:在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。

  9、问:为什么离心过程会发生堵管?

  答:若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是缓冲液不合适,若是蛋白浓度可用多个超滤管同时超滤,降低蛋白浓度;若是缓冲液不合适,需要跟换合适的缓冲液,直到蛋白不发生沉淀。

  10、问:超滤管是无菌的吗?

  答:不是

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