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小鼠ELISA试剂盒操作步骤及实验提醒

更新时间:2024-03-21    点击次数:1330

  小鼠ELISA试剂盒操作步骤及实验提醒

 

  小鼠ELISA试剂盒操作步骤:

  1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。

  2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3. 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。

  4. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

  5. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

  6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  7. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  8. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  9. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  实验提醒:

  1、混合蛋白溶液时,避免起泡。

  2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

  3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

  4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

  5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

  6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

  7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

  8、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

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