琼脂糖电泳槽使用全攻略：从制胶到跑胶的关键技巧与常见问题解析

　　琼脂糖电泳槽使用全攻略：从制胶到跑胶的关键技巧与常见问题解析

　　以下是天津本生技术小编对琼脂糖电泳槽从制胶到跑胶的全流程操作指南及问题解决方案：

　　一、‌制胶关键技巧‌

　　凝胶浓度选择‌

　　0.7%-1%胶适用于1-20kb大片段DNA，2%胶用于50-1000bp小片段;

　　RNA分析建议使用变性琼脂糖凝胶(如含甲醛)。

　　缓冲液配置‌

　　TAE缓冲液适合快速电泳(大片段分离)，TBE缓冲液分辨率更高(小片段分离);

　　缓冲液需现配现用，重复使用会导致pH上升、条带模糊。

　　制胶操作‌

　　微波加热琼脂糖至透明(避免局部沸腾)，冷却至60℃再加核酸染料(如GelRed);

　　倒胶时缓慢倾斜模具，避免气泡产生，梳子垂直插入距底板1mm处。

　　二、‌电泳运行优化‌

　　上样规范‌

　　DNA与Loading Buffer按4:1混合，上样量≤孔容积80%(避免溢出);

　　Marker需预沉降5分钟再通电，防止条带歪斜。

　　电泳参数‌

　　电压设置：5-10V/cm(胶长度)，>20V/cm易致条带扩散;

　　温度控制：常规DNA电泳<30℃，长片段(>10kb)建议<15℃。

　　缓冲液管理‌

　　液面需覆盖凝胶1-2mm，过低会导致条带扭曲;

　　铂金电极需定期用蒸馏水清洗，防止盐结晶腐蚀。

　　三、‌常见问题解析‌

　　问题现象‌ ‌原因分析‌ ‌解决方案‌

　　条带模糊/拖尾 DNA降解、缓冲液陈旧或上样过量 更换缓冲液，减少上样量，避免核酸酶污染

　　带扭曲 电场不均或梳子拔出不规范 预电泳5分钟(低电压)，垂直缓慢拔梳子

　　无条带显示 电极接触不良或DNA未染色 检查电极连接，确认染料活性

　　背景荧光杂斑 制胶杂质或紫外照射过久 过滤琼脂糖溶液，缩短紫外观察时间

　　四、‌设备维护建议‌

　　每次使用后需用蒸馏水冲洗槽体及电极，避免缓冲液残留腐蚀;

　　长期存放时拆卸梳子与模具，防止塑料变形。

　　通过规范操作与针对性优化，可显著提升电泳结果的可重复性。

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　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师。

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