PCR实验常见问题 解决方案

　　以下是PCR实验常见问题及解决方案的总结，结合实验关键点和优化建议：

　　1. 无目的条带扩增‌

　　可能原因‌

　　模板过量(超过体系1/10)或裂解产物未稀释‌。

　　引物设计问题(如复性温度不匹配)或引物降解‌。

　　组织样品不新鲜或DNA聚合酶失活‌。

　　解决方案‌

　　稀释模板至合适浓度(如1mm³组织样品)‌。

　　重新设计引物或优化退火温度(建议50-60℃)‌。

　　使用新鲜样品并更换酶制剂‌。

　　2. 非特异性条带‌

　　可能原因‌

　　镁离子浓度过高或退火温度过低‌。

　　模板污染(如残留杂质)或引物二聚体形成‌。

　　解决方案‌

　　降低镁离子浓度(1.5-2.5mM)并提高退火温度‌。

　　纯化模板或重新设计高特异性引物‌。

　　3. 污染导致假阳性‌

　　可能原因‌

　　实验室环境或试剂污染(如气溶胶残留)‌。

　　NTC组出现扩增曲线‌。

　　解决方案‌

　　使用10%漂白剂清洁工作台，分区操作(试剂配置与模板添加分离)‌。

　　更换新试剂并验证无核酸污染‌。

　　4. 扩增效率低‌

　　可能原因‌

　　反应体系未优化(如酶活性不足)‌。

　　循环数不足或变性时间过短‌。

　　解决方案‌

　　增加循环数至35-40轮，延长变性时间至30秒‌。

　　添加PCR增强剂(如BSA或DMSO)‌。

　　5. 电泳条带异常‌

　　可能原因‌

　　模板降解或电泳条件不当‌。

　　引物浓度过高导致引物二聚体‌。

　　　注：以上资料仅供参考，如需进一步技术支持，可联系相关供应商‌。

　　天津本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。