牛血清的“科研实验”：但你可能用错了？

　　牛血清那些你不知道的事

　　血清的用途

　　科研实验中，细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好，就要用好血清，如特级胎牛血清，它适合各种细胞培养，尤其适合难养细胞。

　　牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。

　　血清的主要成分

　　蛋白质类

　　包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等;

　　多肽类

　　主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;

　　激素类

　　激素对细胞的作用是多方面的。包括：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关;类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用：促生长激素：促进细胞增殖的效应;血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明，血清中的氢化可的松，在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。

　　其他成分

　　如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分的作用并不明显，与蛋白相结合的微量元素对细胞生长起促进作用。

　　使用注意事项

　　血清的保存

　　在-15℃以下血清的有效期为5年，4℃可保存数周，不宜室温保存，不宜反复冻融。配制成培养基后应在四周内用完，一瓶血清如无法一次用完应无菌分装成恰当数量并冷冻保存。

　　血清中的絮状沉淀物

　　血清是多种蛋白质的混合物，在冻融过程中会出现絮状沉淀物，主要原因是由于血清中脂蛋白和纤维蛋白变性所造成。但并不影响血清本身的质量和使用。如需去除可先400g离心取上清液配制成培养基再过滤即可使用。

　　血清的解冻

　　合理的解冻方式可以更好的保护血清质量并可以在上减少絮状沉淀物的产生。血清从低温冰箱中取出后，经4℃冰箱、室温、37℃水浴逐步规则摇晃均匀融解，直至融解后再使用。

　　血清的热灭活

　　将血清严格56℃水浴均匀加温30分钟可以灭活血清中的补体系统。是不是所有用途的血清都需要热灭活呢?对大多数细胞来说是不需要的。激活的补体能参与溶解细胞，刺激光滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。因此在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌肉细胞时，建议使用热灭活血清，在正常情况下加热处理对血清的促细胞生长效应无明显促进作用，甚至会因为加热处理影响血清的质量。

　　血清中的“小黑点”现象

　　血清在经过一段时间的低温冻存再融解后，在正常情况下会出现絮状蛋白沉淀。但往往有用户反应血清中有“小黑点”现象，认为是微生物污染。实验发现血清在37℃环境放置时间过长或经过加热灭活处理，血清中的沉淀物往往会呈增多趋势，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，让使用者误以为是血清遭受微生物污染并在分裂增殖。因此如无必要，可以不进行热灭活处理并保证血清的低温保存。

　　注：以上资料仅供参考，不同品牌产品可能存在设计差异，操作前建议参考说明书‌。

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