荧光定量PCR与常规PCR区别

　　荧光定量PCR(qPCR)与常规PCR的核心区别体现在技术原理、定量能力、操作流程及应用场景等方面，具体对比如下：

　　一、核心技术原理差异‌

　　检测方式‌

　　荧光定量PCR‌：通过荧光染料(如SYBR Green)或特异性探针(如TaqMan)实时监测扩增产物的累积，每个循环均记录荧光信号强度。

　　常规PCR‌：依赖终点检测(如凝胶电泳)分析扩增产物，无法实时追踪反应进程。

　　定量机制‌

　　荧光定量PCR‌：通过Ct值(荧光信号达到阈值时的循环数)与标准曲线计算起始模板拷贝数，灵敏度可达单拷贝水平。

　　常规PCR‌：仅能通过条带亮度半定量，无法精确定量。

　　二、实验操作与数据分析‌

　　操作流程‌

　　荧光定量PCR‌：需严格优化反应体系(如荧光探针浓度)，实验全程封闭以减少污染。

　　常规PCR‌：操作相对灵活，但需开盖进行电泳等后处理步骤。

　　数据分析‌

　　荧光定量PCR‌：输出扩增曲线、溶解曲线及定量结果，可直接反映扩增效率。

　　常规PCR‌：依赖凝胶成像分析，结果解读主观性强。

　　三、应用场景对比‌

　　场景‌ ‌荧光定量PCR‌ ‌常规PCR‌

　　基因表达分析‌ 精确量化mRNA差异表达 仅定性检测基因有无

　　病原体检测‌ 高灵敏度定量病毒载量适用于快速筛查，但定量能力有限

　　突变/SNP分析‌ 结合探针可区分单碱基差异 需后续测序或限制性酶切

　　四、技术局限性‌

　　荧光定量PCR‌：

　　对引物特异性要求高，易受引物二聚体干扰。

　　仪器成本及试剂费用较高。

　　常规PCR‌：

　　灵敏度低，易漏检低拷贝模板。

　　存在溴化乙锭等有毒试剂的安全隐患。

　　五、选择建议‌

　　优先选择荧光定量PCR‌：需精准定量、低拷贝检测或实时监测的场景。

　　选择常规PCR‌：预算有限、仅需定性分析或扩增长片段(>500bp)时。

　　注：以上资料仅供参考，如需更详细的操作图示或标准曲线绘制方法，可参考产品附带的说明书或联系供应商获取技术支持。

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