Elisa实验技能要点与常见问题解析

　　以下是本生ELISA实验的技能要点与常见问题解析，结合实验操作规范及关键注意事项：
 

　　一、ELISA实验核心技能要点‌
 

　　试剂准备与平衡‌
 

　　试剂盒需室温平衡20-30分钟，避免温度差异影响反应稳定性‌。
 

　　标准品需涡旋溶解，静置至溶解，避免反复冻融‌。
 

　　加样规范‌
 

　　垂直悬空加样，避免贴壁或产生气泡，每孔加样量需一致(如50μL标准品或样本)‌。
 

　　设置复孔(至少2孔/样本)以提高数据可靠性‌。
 

　　孵育与洗涤‌
 

　　孵育温度严格控制在37℃，封板膜密封防止蒸发‌。
 

　　手工洗板需注满洗涤液(350μL/孔)，静置1分钟后拍干，重复5次;机器洗板需检查冲洗头是否堵塞‌。
 

　　显色与检测‌
 

　　TMB底物避光反应15分钟，终止液加入后5分钟内测定OD值(450nm)‌。
 

　　二、常见问题及解决方案‌
 

　　问题‌ ‌可能原因‌ ‌解决方案‌
 

　　空白孔OD值过高 洗涤不净或试剂污染 更换新鲜洗涤液，重复洗板‌
 

　　平行孔CV值>10% 加样误差或孵育温度波动 校准移液器，使用恒温箱‌
 

　　显色不均匀 底物混合不充分 显色前充分摇匀试剂‌
 

　　三、关键注意事项‌
 

　　样本处理‌
 

　　血清/血浆需离心(2000×g，15分钟)去除颗粒物，避免溶血或脂血干扰‌。
 

　　组织匀浆需加PBS离心取上清，冻存样本需避免反复冻融‌。
 

　　数据验证‌
 

　　标准曲线R²需≥0.99，样本稀释线性应在80-120%范围内‌。
 

　　四、视频学习资源‌
 

　　如需更直观的操作演示，可参考以下视频：
 

　　以上内容综合了ELISA实验的操作要点与问题解决方案，实际应用中需结合试剂盒说明书调整细节‌。
 

　　注：以上资料仅供参考，具体其他信息请咨询技术老师或品牌供应商。
 

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