ELISA试剂盒检测不成功的原因及解决方案

　　ELISA试剂盒检测不成功的原因及解决方案

　　1. ‌低信号强度(灵敏度不足)‌

　　可能原因‌：

　　抗原/抗体浓度不足或孵育时间过短‌。

　　酶标记物(如HRP)失活或底物(如TMB)避光不当‌。

　　解决方案‌：

　　延长抗体孵育时间(如4℃过夜)或增加酶标记物浓度‌。

　　显色反应严格避光，避免底物降解‌。

　　2. ‌高背景信号‌

　　可能原因‌：

　　封闭不充分(如BSA或脱脂牛奶封闭时间不足)‌。

　　洗涤不净(残留未结合的酶或底物)‌。

　　解决方案‌：

　　延长封闭时间(≥30分钟)并确保洗涤液充分浸泡孔内‌。

　　控制温育温度(37℃±0.5℃)，避免蒸发导致浓度异常‌。

　　3. ‌重复性差(复孔差异大)‌

　　可能原因‌：

　　加样量不一致或移液器未校准‌。

　　孵育时间/温度波动(如频繁开盖)‌。

　　解决方案‌：

　　使用校准后的移液器，同步加样时间‌。

　　使用恒温箱并减少开盖次数‌。

　　4. ‌样本问题‌

　　可能原因‌：

　　样本溶血、反复冻融或细菌污染‌。

　　保存条件不当(如未分装导致反复冻融)‌。

　　解决方案‌：

　　离心后取上清，避免溶血干扰;分装保存于-80℃‌。

　　短期检测样本可4℃保存，长期需冻存‌。

　　5. ‌操作流程问题‌

　　可能原因‌：

　　显色时间不足或过长(超出说明书范围)‌。

　　试剂污染或过期(如酶标板未密封)‌。

　　解决方案‌：

　　严格按说明书控制显色时间(通常10-15分钟)‌。

　　使用新鲜试剂，避免交叉污染(如更换吸头)‌。

　　6. ‌其他干扰因素‌

　　温度波动‌：水浴或恒温箱需预热至平衡温度，避免叠放微孔板‌。

　　时间差异‌：大批量样本建议分批操作，减少操作时差‌。

　　通过优化上述环节，可显著提高ELISA检测的准确性和重复性‌。

　　注：以上资料供参考，不作为实验依据，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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