Elisa实验：ELISA板包被原理

　　ELISA板包被原理

　　ELISA板包被是通过物理吸附或化学偶联将目标分子(抗原/抗体)固定在微孔板表面的关键步骤，其原理和操作要点如下：

　　1. ‌包被的基本原理‌

　　物理吸附(被动包被)‌

　　聚苯乙烯微孔板的疏水性表面在碱性缓冲液(如pH 9.6的碳酸盐缓冲液)中，通过疏水相互作用和静电吸附固定蛋白质‌。适用于大多数大分子(如抗体、病毒蛋白)，但小分子(如肽段<10个氨基酸)因吸附能力弱需采用化学偶联‌。

　　化学偶联(主动包被)‌

　　使用交联剂(如EDC/NHS)将蛋白质的氨基或羧基与微孔板表面共价结合，适用于小分子抗原、多糖等不易吸附的分子‌。

　　2. ‌关键操作步骤‌

　　缓冲液选择‌：常用碳酸盐缓冲液(pH 9.6)优化蛋白质吸附‌。

　　封闭处理‌：包被后需用BSA或脱脂奶粉封闭未结合位点，减少非特异性结合‌。

　　温度与时间‌：4℃过夜包被可增强结合稳定性，37℃孵育适用于快速实验‌。

　　3. ‌注意事项‌

　　小分子包被‌：需通过载体蛋白(如KLH)偶联或化学交联提高吸附效率‌。

　　洗涤控制‌：包被后需洗涤去除未结合分子，避免干扰后续反应‌。

　　通过合理选择包被方法及优化条件，可确保ELISA检测的灵敏度和特异性‌。

　　注：本试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断。具体操作请以实际试剂盒说明书为准。

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