人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒操作步骤

    人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒操作步骤

    人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒的操作步骤主要基于‌双抗体夹心法‌，其核心流程包括样本处理、试剂准备、加样孵育、洗涤显色及结果分析等环节‌。以下是具体步骤的详细说明：

    一、样本处理

    样本类型‌：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞上清液等生物样本‌。

    采集要求‌：

    血清/血浆需使用无抗凝剂或EDTA/肝素抗凝的真空采血管，避免溶血或高血脂样本‌。

    血液凝固后离心分离血清，4℃短期保存（≤3天）或-20℃/-80℃长期保存，避免反复冻融‌。

    稀释建议‌：若样本浓度高于标准曲线最高值（如IL-2检测上限为500pg/ml），需用标准品稀释液预稀释‌。

    二、试剂准备

    回温与溶解‌：

    实验前30分钟将试剂盒及样本置于室温平衡。

    浓缩洗涤液若结晶，需37℃水浴溶解。

    洗涤液配制‌：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释为1倍工作液（如1ml浓缩液+19ml蒸馏水）‌。

    标准品稀释‌：

    冻干标准品复溶后（如1000pg/ml），按梯度稀释（如250、125、62.5…pg/ml）。

    复溶后未用完的标准品需分装冻存，避免反复冻融。

    生物素化抗体工作液‌：用检测稀释液将100倍浓缩抗体稀释为1倍应用液，现配现用。

    三、实验操作步骤

    加样与孵育‌：

    每孔加入50μL标准品或待测样本，设置复孔。

    加入50μL生物素化抗体工作液，封板后室温孵育1小时。

    洗涤‌：弃去孔内液体，用1×洗涤液洗板5次，每次拍干残留液体‌。

    酶标物反应‌：每孔加入100μL链霉亲和素-HRP溶液，避光孵育30分钟。

    显色与终止‌：

    每孔加入100μLTMB底物液，避光显色15分钟‌。

    加入50μL终止液（如2MH₂SO₄），溶液由蓝变黄‌。

    读数‌：终止后10分钟内，用酶标仪测定450nm（及630nm校正波长）的吸光度（OD值）‌。

    四、结果分析

    标准曲线绘制‌：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，拟合四参数逻辑回归曲线‌。

    浓度计算‌：根据样本OD值代入标准曲线方程，计算IL-2浓度‌。

    质量控制‌：板内/板间变异系数应<10%，确保实验重复性‌。

    注意事项

    避免污染‌：使用一次性枪头，防止交叉污染‌。

    孵育时间‌：严格按说明书控制，避免过度显色或反应不足‌。

    样本保存‌：避免反复冻融，NaN₃等防腐剂可能干扰检测‌。

    注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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