详述 PCR 技术的基本原理、实验步骤及应用

　　一、实验目的

　　1.掌握聚合酶链式反应的原理。

　　2. 掌握移液枪和 PCR 仪的基本操作技术。

　　二、实验原理

　　PCR 可以被认为是与发生在细胞内的 DNA 复制过程相似的技术，其结果都是以原来的 DNA 为模板产生新的互补 DNA 片段。细胞中 DNA 的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR 是在试管中进行的 DNA 复制反应，基本原理与细胞内 DNA 复制相似，但反应体系相对较简单。

　　PCR 由变性 -- 退火 -- 延伸三个基本反应步骤构成：①模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 94℃左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备;

　　②模板 DNA 与引物的退火 (复性)：模板 DNA 经加热变性成单链后，温度降至 55℃左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合;

　　③引物的延伸：DNA 模板 -- 引物结合物在 Taq 酶的作用下，以 dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链。

　　重复循环变性 -- 退火 -- 延伸三过程，就可获得更多的 “半保留复制链"，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4 分钟， 2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

　　三、实验试剂与器材

　　模板 DNA、2.5mmol/L dNTP

　　Taq DNA 聚合酶(5U/μL)、SSR 引物

　　10 ×buffer、15mmol/L Mg2+、ddH2O

　　PCR 仪、移液枪、PCR 板

　　四、实验步骤

　　1、配制 20μL 反应体系，在 PCR 板中依次加入下列溶液：

　　模板 DNA 2μL

　　引物 1 1μL

　　引物 2 1μL

　　dNTP 1.5μL

　　MgCl2 2μL

　　10×buffer 2μL

　　ddH2O 10μL

　　Taq 酶 0.5

　　2、设置 PCR 反应程序。

　　3、上样，启动反应程序。

　　4、扩增产物的电泳检测。

　　产品优势：

　　本生生物供应实验室耗材,PCR 耗材品种全，可替代仪器原厂耗材，性价比高，质量稳定，对用户可以节省实验成本。

       注：以上仅供参考！

　　适应客户：

　　医院检验科 PCR 实验室，中心实验室，肝病中心;第三方检测机构，科研院所，大专院校，制药厂，试剂生产厂家，疾控中心，检验检疫。