植物Elisa试剂盒操作流程，减少了实验操作的复杂性

　　植物Elisa试剂盒操作流程，减少了实验操作的复杂性

　　植物ELISA试剂盒的标准化操作流程确实能有效减少实验操作的复杂性‌，同时降低人为误差，提升检测结果的重复性与可靠性，本生BUNSEN整理标准化流程如下，可参考：

　　一、样本制备(按样本类型标准化处理)

　　叶片样本‌

　　优先取感病病变组织，无症状组织也可检测;检测时按‌1:10比例‌用GEB提取液研磨稀释，例：0.3g组织加3mL GEB提取液，也可先单独研磨出汁液，再按100μL汁液加1mL GEB稀释。

　　种子样本‌

　　每个亚样本取100粒种子，充分研磨破碎后按‌1:10比例‌加GEB提取液，混匀后室温静置30分钟，取上清作为检测样本。

　　特殊样本‌

　　除植物组织外，还可检测菌丝悬液、水样、土壤样本，如需对应protocol可联系试剂盒厂商获取。

　　二、实验前准备

　　提前将本生试剂盒所有试剂、待检测样本从2-8℃取出，室温平衡30-60分钟，避免温度差影响反应活性。

　　按说明书比例稀释浓缩洗涤液(通常为1×PBST)备用。

　　三、加样与孵育

　　倒出预包被好抗体的本生的酶标板孔内液体，用1×PBST洗涤3次，用无绒纸巾拍干孔内残留液体;若要提升检测灵敏度，可提前加1×PBST浸泡微孔4分钟后再沥干。

　　依次在对应孔位加入100μL处理好的样本，设置空白对照、阴性对照、阳性对照孔，盖上封板膜后37℃孵育(若采用过夜孵育则需4℃)。

　　四、洗涤与加酶

　　孵育结束后弃去孔内液体，重复洗涤3-5次(手工洗板每孔加液≥300μL，静置30秒再抽吸，每次拍干更换干净吸水纸)，最后拍干酶标板。

　　按要求加入酶标二抗，再次封板后37℃孵育对应时间，孵育完成后重复洗涤步骤。

　　五、显色与读数

　　每孔加入现配的TMB底物溶液，37℃避光显色5-30分钟，肉眼可见明显颜色梯度即可终止。

　　加入终止液终止反应，15分钟内用酶标仪测定对应波长的吸光度(OD值)。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线(推荐4参数逻辑拟合)，将样本OD值代入曲线计算浓度后，乘以样本稀释倍数即为最终检测浓度。

　　标准化流程将每一步的样本比例、操作时间、洗涤次数都做了明确要求，实验人员只需要按步骤执行，大幅降低了操作复杂度和人为误差。

　　注：以上科研产品资料仅供参考!

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