ELISA实验：酶联免疫试剂盒吸附测定原理

　　ELISA实验：酶联免疫试剂盒吸附测定原理

　　酶联免疫吸附测定(ELISA)的原理是：利用抗原抗体的特异性结合+酶催化底物显色，实现对目标待测物的定性或定量检测‌，具体机制结合试剂盒结构拆分说明如下：

　　原理基础

　　ELISA试剂盒基于‌固相吸附‌和‌酶促反应‌两个技术：

　　固相吸附‌：将抗原或抗体预先固定在聚苯乙烯微孔板孔壁上，固相载体可以持续吸附蛋白质，同时保留其免疫活性。

　　特异性结合‌：利用抗原和抗体可以发生特异性结合的特性，让带有酶标记的抗体(或抗原)与固定在固相上的对应抗原(或抗体)结合。

　　显色放大检测‌：结合在固相上的酶可以催化底物发生显色反应，酶催化反应会逐级放大信号，显色的深浅和目标待测物的含量直接相关，通过酶标仪读取吸光度即可计算待测物浓度。

　　试剂盒检测的通用流程

　　包被‌：将特异性抗体吸附到微孔板孔壁，洗涤去除未结合的抗体。

　　封闭‌：加入封闭液封闭孔壁上未被吸附的空白位点，减少后续非特异性结合带来的背景干扰，再次洗涤。

　　加样结合‌：加入待测样本，样本中的抗原会和固相抗体特异性结合，形成固相抗原-抗体复合物，洗涤去除未结合的杂质。本生BUNSEN Elisa试剂盒

　　加酶标抗体‌：加入酶标记的特异性抗体，会和结合在固相上的抗原结合，形成「固相抗体-抗原-酶标抗体」复合物，洗涤去除游离酶标抗体。

　　显色检测‌：加入酶对应的底物，酶催化底物水解/氧化产生有色产物，产物的量与样本中待测抗原的量成正比，最后通过酶标仪测定吸光度(OD值)，就能计算出待测物的浓度。

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