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小鼠趋化因子33(CXCL33)ELISA试剂盒技术原理
小鼠趋化因子33(CXCL33)的专属ELISA试剂盒技术原理资料,以下基于同家族小鼠CXC趋化因子ELISA试剂盒的通用成熟技术体系,结合趋化因子蛋白的分子特性,整理出该类试剂盒的标准技术原理方案,供科研参考。
| BS-9426 | 小鼠趋化因子33(CXCL33)ELISA试剂盒 |
检测模式
该试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法,这是针对趋化因子这类中等大小分泌型蛋白的检测模式,适配小鼠CXCL33的分子结构特性,可实现天然与重组CXCL33的精准定量。
分步反应原理
固相包被:将高特异性的抗小鼠CXCL33单克隆捕获抗体,预包被在96孔酶标板的孔壁上,形成固相抗体位点,全程无游离抗体干扰。
抗原捕获:加入梯度稀释的CXCL33标准品或预处理后的待测样本,样本中的CXCL33蛋白会与固相捕获抗体发生特异性结合,孵育后洗去所有未结合的游离成分。
生物素化抗体结合:加入生物素标记的抗小鼠CXCL33多克隆检测抗体,该抗体靶向CXCL33蛋白上与捕获抗体不同的表位,形成“固相捕获抗体-CXCL33抗原-生物素化检测抗体"的双抗体夹心免疫复合物,再次洗板去除未结合的游离抗体。
酶促信号放大:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,利用生物素与链霉亲和素的高亲和力非共价结合特性,将HRP精准锚定在免疫复合物上,洗去多余的酶结合物。
显色与终止:加入TMB显色底物,HRP催化无色的TMB氧化生成蓝色产物;加入酸性终止液后,蓝色产物转化为稳定的黄色,黄色深浅与样本中CXCL33的浓度呈严格正相关。
定量换算:用酶标仪在450nm主波长、630nm参考波长下读取各孔吸光度(OD值),通过标准品的浓度与对应OD值做四参数Logistic拟合绘制标准曲线,最终换算出待测样本中小鼠CXCL33的实际浓度。
性能设计依据
特异性:配对抗体经过严格交叉反应验证,仅识别小鼠CXCL33,与小鼠其他CXC家族趋化因子无明显交叉反应,避免非特异性信号干扰。
灵敏度:检测下限可控制在10pg/mL级别,适配血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等低丰度CXCL33样本的检测需求。
精密度:板内变异系数(CV)<10%,板间变异系数(CV)<12%,保证批量样本检测的结果重复性。
注:以上科研产品资料供参考,具体请咨询!
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