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rna试剂盒提取步骤

发布时间:2022-05-30    点击次数:129
   rna试剂盒提取步骤:
  常规植物样品总 RNA小量抽提1.植物样品的研磨。
  收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA的降解。使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。RNA的产量取决于样品类型和研磨效果。
  注:研磨后的植物粉末可直接保持于-70°c。
  快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至 1.5ml预冷的离心管中。
  注:在加入裂解液之前,不要让样品解冻。初次使用时,推荐先使用 50mg,待取得理想结果后,
  再酌情提高用量。
  2.立即加入500ulBuffer RL/ B -ME 混合液至样品中。立即于最高速度涡旋30-60秒充分打散样品,室温静置3-5分钟让样品充分裂解。
  注:使用前分装适量的 Buffer RL,每 1ml Buffer RL 加入20ulβ -疏基乙醇(B-ME)或2M DTT。若植物用量增加超过100mg,按比例增加 Buffer RL/2-ME的用量。
  3.室温下,14,000 xg离心5 分钟。
  4.把 gDNA过滤柱装在2ml 收集管中。把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。14,000 xg 离心1分钟。
  5.弃去 gDNA 过滤柱。加入 o.5倍体积无水乙醇(~250ul)至滤液中。用移液枪吸打 3-5次混匀。
  6.把 HiPure RNA Mini Column装在 2ml 收集管中。转移第5步的混合液至 RNA 柱子中。10,000 xg 离心30-6o秒。
  7.(可选)这一步可插入DNase进行膜上消化。(请另外订购 DNase On Column Kit进化膜上 DNase 消化)。
  8.倒弃滤液,把柱子装在收集管中。加入500ul Buffer RW1 至柱子中。10,000 xg
  离心30-60秒。9.倒弃滤液,把柱子装回收集管中。加入600ul Buffer RW2 (己用乙醇稀释)至柱子中。10,000 ×g离心30-60秒。
  注:在使用 Buffer RW2之前,必须按瓶子标签指示用无水乙醇进行稀释。
  10.倒弃滤液,把柱子重新装回收集管中。加入60oul Buffer RW2(己用乙醇稀释)至柱子中。10,000×g离心30-60秒。
  11.倒弃滤液,把柱子套回空的收集管。10,000× g 离心空柱⒉分钟甩干柱子。12.将柱子转移至新的 1.5ml离心管。加入 30-50ul DEPC 水至柱子的膜中央。静置2分钟。10,000 × g离心1分钟。
  13.(可选)再加入 30-50ul DEPC水至柱子的膜中央。静置﹖分钟。10,000 × g 离心1分钟。
  注: HiPure RNA Column最小的洗脱体积是 30ul,小于 3oul 会导致RNA 的洗脱效率下降。如果 RNA产量超过30ug,推荐按第13步进行第二次洗脱。
  14.弃去柱子,把 RNA保存于-80°c。

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