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本生荧光定量 PCR 耗材如何使用及选择注意事项!

发布时间:2022-11-10    点击次数:51

标签:荧光定量 PCR 耗 本生生物 实验耗材 96 孔 PCR 孔板
  

  荧光定量 PCR 耗材如何使用及选择注意事项 !

本生生物详解:高通量的 96 孔 PCR 板和 8 联管是在聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction ,PCR) 中,主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA 聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。医疗级聚丙烯 (PP) 材质因其的纯净度和稳定性,能更好适应 PCR 反应过程中反复高低温设定,并且能够实现高温高压灭菌操作,常常被用于 PCR 耗材的生产。随着荧光定量 PCR 技术的普及,该技术被广泛用于遗传、生化、免疫、医药等领域,不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有 DNA,RNA 的研究领域。

如何正确使用 96 孔 PCR 孔板?

>PCR 板有透明和乳白色可选,其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量 PCR 仪 (如伯乐 CFX 系列,ABI 7500fast 以上型号, Roche 480 系列),但如果荧光定量 PCR 仪是底部光源的,则应选择透明的。

>PCR 板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式,不同厂家的荧光定量 PCR 仪会设计不同的切角或边缘凸起,请选择适合该 PCR 仪的板子。

PCR板.jpg


>PCR 板又分 100ul 体积 (矮板) 和 200ul 体积 (高板),根据机型的不同选择,选择不同高度孔板,避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。

> 当使用 96 孔板做荧光定量 PCR 实验的时候,推荐使用光学膜代来密封反应孔。正确的封膜方法是:先沿着 96 孔板的纵向压膜,然后横向,最后沿着板的边缘按压使之密封。具体手法见下面图示。

加样后会在管壁上飞溅一些小液滴,另外反应体系内也会有一些气泡,需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用专用的微孔板离心机解决上述问题。

BUNSEN 本生 PCR 板属于一次性消耗品,生产一次成型,不建议剪开使用容易造成实验误差增加,不能清洗或部分重复利用。不要为了节省一点小钱,而给实验带来后续分析上的困扰。


样本量少,用 8 联管做实验又该注意哪些呢?

>8 联管也分乳白和透明两种,选择方式和孔板一样,根据 PCR 仪的荧光信号采集方式决定。

>8 联管同样也有 0.1 ml(矮管) 和 0.2 ml(高管),根据 PCR 仪的加热模块体积确定。

96联可拆卸光学平盖.jpg



>BUNSEN 本生 8 联管的盖子一般有光学平盖和凸型圆盖之分,光学平盖适用于荧光定量 PCR,圆盖适用于普通 PCR。

> 使用单管或 8 联管做实验,并且样本数量不多的时候,建议在样品加热块 (TRAY) 上对称地安放样品,最好是纵向放置,并且优先放在第 6 列或第 7 列,然后逐渐向两边放置。这样做的好处是热盖压下来的时候不至于发生倾斜,各个反应管的受力和受热都比较均匀,提高孔与孔之间的数据精密性。也可以在加热模块四角的位置,放置 4 个单管平衡热盖压力,避免扩增少量样本时出现管子变形的情况。

八联管.jpg


> 管盖没有盖好造成 PCR 反应液热蒸发,影响反应温度的准确控制及反应也各成份的浓度,同时也成为一个污染源。不但会因压盖时由于粗心或者用力不均致使部分盖子变形,而且还会造成样品的交叉污染,所以我们推荐用独立管盖的 8 联管,每管盖一体,确保样本独立反应,避免交叉污染。

BUNSEN 本生通用耗材:深孔板、96 孔硅胶垫、吸头、封板膜、玻片、试管、量杯、试剂槽、离心管、移液器等。

细胞培养类:血清瓶系列、细胞培养玻片、细胞铲/刮/过滤器、移液管、细胞培养皿/板/瓶、培养小室。

核酸提取耗材:移液器吸头系列、深孔板及磁套系列、PCR 管/PCR 板系列、提取管。

试剂包装类:广口试剂瓶、窄口试剂瓶、保存管、试剂盒、血清、蛋白、抗体/抗原等。

病毒采样:一次性病毒取样器/采样器、唾液采集器等。

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