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BUNSEN本生带您解读:PCR实验耗材

更新时间:2023-03-28    点击次数:436

  BUNSEN本生带您解读:PCR实验耗材


  什么是聚合酶链式反应?

  聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是一项用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它是在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下,将该段DNA扩增至足够数量,以便进行结构和功能分析。

  影响PCR实验的因素之一——耗材

  在PCR实验中,影响扩增效果的因素有很多。我们能想到的有dNTP的质量与浓度、模板核酸的量与纯化程度、引物的设计、DNA聚合酶的浓度、扩增长度等问题。 实际上,使用的耗材也可能会影响实验结果,而这往往被我们所忽略。因此在选择实验耗材前,我们还需要了解PCR耗材相关的特性和术语。


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  如何选择合适的PCR耗材?

  1、原材料

  PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材质。

  因其为生物学惰性材料,表面不易粘附生物分子,且有着良好的化学耐性,及温度耐受性 (可121℃高压灭菌,也可以承受热循环过程中的温度变化)。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触,因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。

  2、选择合适的容积

  PCR管的体积规格大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上,优先推荐选用低容管。因为低容反应管/板有着较小的上方空间,可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时,需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降,溢出及交叉污染,而加样过少可能会造成样品蒸发损失。

  3、本生PCR管管盖的选择

  平盖与凸盖各有优势:

  平盖可为qPCR提供精确的荧光信号传递;便于书写标记;合盖容易,密封性好,易于操作。

  凸盖与PCR仪热盖接触,减少压力引起的反应管变形,更好的防止液体蒸发。但会影响荧光信号传递,无法应用于qPCR实验。

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  4、96孔板裙边的选择

  无裙边板:可适用于大多数的PCR仪或qPCR仪,但不适用于自动化、应用。移液过程中稳定性不高,需要配合板托使用。

  半裙边板:可适配标签或应用条码,适合自动化应用,且有着较好的移液稳定性。

  本生全裙边板:非常适用于自动化实验应用,也可适配标签及应用条码。机械强度较好,可适用于凸出模块的PCR仪,且移液过程中稳定性高。

  5、根据实验选择耗材

  根据检测方法的不同,耗材的选择也不同。PCR实验分为普通PCR法和荧光定量PCR法。普通PCR法一般是终点PCR跑胶法测定,所以所用耗材的导热性和密封性和实验结果有着密不可分的关系;而荧光定量PCR是实时检测荧光信号,除了导热性和密封性外,对透光性和避光性也有所要求。

  荧光定量PCR耗材

  导热性:导热性越好越均一,PCR的速度就越快,准确度也越高。

  密封性:密封性越好,产物的挥发越少,得到的产物就越多,同时气溶胶的产生也越少,对于下一轮实验的污染也就越少,也就意味着假阳性的产生率越低。

  避光性:这是针对荧光定量而言的,如果我们在整个实验过程中没注意避光,带有荧光的试剂过度被消耗,那直接就会影响我们实验的扩增效率,导致产生不准确的结果。

  透光性:这也是对于荧光定量而言,我们知道它是一种实时定量的方式,那么耗材本身的透光性就直接关系到我们检测到的荧光信号多少。如果选择耗材透光性良好,需要检测到的信号就会变得微弱,那就会造成我们对结果的误判。所以对于荧光定量而言,白色PCR板效果优于透明PCR板。

  PCR实验耗材 本生公司产品种类已超过万种,正广泛应用于科研院校、中心实验室、分子生物学等科研域。公司丰富的产品既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求,也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。


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