BUNSEN本生：血清使用时的一些注意事项

　　BUNSEN本生：血清使用时的一些注意事项

　　使用血清的时候，需注意的操作 :

　　1、冻结血清时，请按照所主张的逐步冻结法(-20℃至4℃至室温)，若血清冻结时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，试验显示十分简单发生沉淀物。

　　2、冻结血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，削减沉淀的发生。

　　3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，以致血清中许多较不稳定的成分也会因此遭到损害，而影响血清的质量。

　　4、血清的热灭活十分简单形成沉淀物的增多，若非必要，能够无须做此步骤。

　　5、若有必要做血清的热灭活，请恪守56℃，30 分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会形成沉淀物的增多。

　　一、储存条件

　　血清一般储存于-20 ℃，同时应避免反复冻融。若存放于 4 ℃ 时，请勿超过一个月。

　　二、血清中絮状沉淀的处理

　　沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白，这是正常特性，不会影响产品性质。

　　离心血清(400 g，1-2 分钟)或简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。

　　大多情况轻轻摇动沉淀并加热至 37 ℃就会再溶解。

　　一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。

　　三、使用浓度

　　一般为 5-20 % ，是 10 %。过多血清容易使培养中的细胞发生变化，特别是一些二倍体的无限细胞系，迅速生长之后容易发生恶性转化。

　　四、解冻方法

　　血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。最好在 4 ℃ 低温冰箱里放置一天或直到融化为止。如果时间不允许低温解冻, 可参考以下解冻方法：

　　1. 将血清从冰箱里取出后，在室温下放置 15-20 分钟。

　　2. 然后将血清放置在 37 ℃ 水浴槽里。过高温度会导致血清出现浑浊现象。不要让水淹没装有血清的瓶子。

　　3. 每隔 5 分钟左右适当摇晃瓶子，直到地解冻为止。

　　五、热灭活方法

　　加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养 ES 细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。若必须做血清的热灭活，请遵守56 ℃，30 分钟的原则，并且随时摇晃均匀。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

　　1. 用上述描述的方法将血清在低温冰箱或室温下解冻。

　　2. 在血清解冻时，将一个容器装入适量的水，用于模拟装有血清瓶子在热处理过程中检测瓶内水的温度。容器大小、质地和装水的量最好与装血清的瓶子相同或相似。

　　3. 待血清解冻时，将含有血清的瓶子放在预热的 56 ℃水浴里，不要将含有血清的瓶子让水淹没或接近瓶子的盖子，以免导致污染。

　　4. 在开始加热处理时，要及时使用温度计测定模拟瓶内水的温度。

　　5. 在预热期间，每隔 3-5 分钟要适当摇晃含有血清和水的瓶子，确保瓶内液体均匀加热。

　　6. 一旦模拟瓶内的水温达到 55.8± 0.5 ℃时，开始计时，并在此温度范围内热处理 30 分钟，然后立即放在冰上冷却。

　　为防止在热处理过程中由蛋白质变性而导致的浑浊和沉淀现象，热处理时应注意下列事项：

　　1. 不要用高于 25 ℃ 以上的温度加快解冻速度。

　　2. 在热处理之前，要使血清融解。

　　3. 不要使热处理的温度高于 56.3 ℃

　　4. 热处理时间不要长于 30 分钟。

　　5. 在加热过程中一定要定时摇动血清。

　　六、避免事项

　　1.避免反复冻融

　　长时间储存在 2-8 ℃ 时，血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。

　　2.避免产生沉淀

　　解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

　　血清分装时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。

　　勿直接由 -20 ℃ 直接至 37 ℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

　　勿将血清置于 37 ℃ 太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

　　七、建议事项

　　一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

　　血清 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。