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BUNSEN本生:血清使用时的一些注意事项

更新时间:2023-06-08    点击次数:340

  BUNSEN本生:血清使用时的一些注意事项


  使用血清的时候,需注意的操作 :

  1、冻结血清时,请按照所主张的逐步冻结法(-20℃至4℃至室温),若血清冻结时改变的温度太大(如-20℃至37℃),试验显示十分简单发生沉淀物。

  2、冻结血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,削减沉淀的发生。

  3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,以致血清中许多较不稳定的成分也会因此遭到损害,而影响血清的质量。

  4、血清的热灭活十分简单形成沉淀物的增多,若非必要,能够无须做此步骤。

  5、若有必要做血清的热灭活,请恪守56℃,30 分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会形成沉淀物的增多。

  一、储存条件

  血清一般储存于-20 ℃,同时应避免反复冻融。若存放于 4 ℃ 时,请勿超过一个月。

  二、血清中絮状沉淀的处理

  沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白,这是正常特性,不会影响产品性质。

  离心血清(400 g,1-2 分钟)或简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。

  大多情况轻轻摇动沉淀并加热至 37 ℃就会再溶解。

  一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。

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  三、使用浓度

  一般为 5-20 % ,是 10 %。过多血清容易使培养中的细胞发生变化,特别是一些二倍体的无限细胞系,迅速生长之后容易发生恶性转化。

  四、解冻方法

  血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。最好在 4 ℃ 低温冰箱里放置一天或直到融化为止。如果时间不允许低温解冻, 可参考以下解冻方法:

  1. 将血清从冰箱里取出后,在室温下放置 15-20 分钟。

  2. 然后将血清放置在 37 ℃ 水浴槽里。过高温度会导致血清出现浑浊现象。不要让水淹没装有血清的瓶子。

  3. 每隔 5 分钟左右适当摇晃瓶子,直到地解冻为止。

  五、热灭活方法

  加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养 ES 细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。若必须做血清的热灭活,请遵守56 ℃,30 分钟的原则,并且随时摇晃均匀。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

  1. 用上述描述的方法将血清在低温冰箱或室温下解冻。

  2. 在血清解冻时,将一个容器装入适量的水,用于模拟装有血清瓶子在热处理过程中检测瓶内水的温度。容器大小、质地和装水的量最好与装血清的瓶子相同或相似。

  3. 待血清解冻时,将含有血清的瓶子放在预热的 56 ℃水浴里,不要将含有血清的瓶子让水淹没或接近瓶子的盖子,以免导致污染。

  4. 在开始加热处理时,要及时使用温度计测定模拟瓶内水的温度。

  5. 在预热期间,每隔 3-5 分钟要适当摇晃含有血清和水的瓶子,确保瓶内液体均匀加热。

  6. 一旦模拟瓶内的水温达到 55.8± 0.5 ℃时,开始计时,并在此温度范围内热处理 30 分钟,然后立即放在冰上冷却。

  为防止在热处理过程中由蛋白质变性而导致的浑浊和沉淀现象,热处理时应注意下列事项:

  1. 不要用高于 25 ℃ 以上的温度加快解冻速度。

  2. 在热处理之前,要使血清融解。

  3. 不要使热处理的温度高于 56.3 ℃

  4. 热处理时间不要长于 30 分钟。

  5. 在加热过程中一定要定时摇动血清。

  六、避免事项

  1.避免反复冻融

  长时间储存在 2-8 ℃ 时,血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。

  2.避免产生沉淀

  解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

  血清分装时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。

  勿直接由 -20 ℃ 直接至 37 ℃ 解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

  勿将血清置于 37 ℃ 太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。

  七、建议事项

  一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

  血清 本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。


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