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ELISA实验要点:ELISA实验过程中会遇到哪些问题,如何解决

更新时间:2023-12-11    点击次数:251

  标签:ELISA 本生 试剂盒 抗原 抗体 酶标记抗体


  ELISA实验要点:ELISA实验过程中会遇到哪些问题,如何解决!

  高背景信号:

  可能原因

  洗板不充分;  样品或标准品中含干扰物;  缓冲液受污染;

  解决方法

  将洗涤缓冲液加入孔中洗涤,确保洗涤充分;  确保在洗涤前弃掉了所有残留抗体溶液;  设置空白对照;  重新配制缓冲液;

  无型号:

  可能原因

  试剂添加顺序错误或试剂配制有误;  HRP被叠氮化合物污染;  抗体用量不足;

  解决方法

  重复实验;  检查试剂配制方法;  复核试验试剂添加流程;  使用新鲜配制的试剂;  使用推荐的抗体量;

  整版呈规则蓝色:

  可能原因

  洗板不充分或跳过洗板步骤未去除残留的非结合过氧化物酶;  封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染;  缓冲液有金属或HRP污染;

  解决方法

  严格按照说明书洗涤流程操作;  每步均需使用新的封板膜或试剂储液槽;  配制新鲜缓冲液;

  标准曲线不佳梯度不明显:

  可能原因

  实验操作流程有误  标准曲线稀释计算错误;

  解决方法

  严格按照说明书操作流程;  重新计算制作新的标准曲线;

  板内重复性差:

  可能原因

  洗板不充分;  重复使用封板胶纸;  未使用封板胶纸;

  解决方法

  将洗涤缓冲液加入孔中洗涤,确保洗涤充分;  每步均需更换使用新的封板胶纸;  需使用封板胶纸;

  板间重复性差:

  可能原因

  洗板不充分;  孵育温度发生变化;  操作流程改变;  封板胶纸重复使用导致HRP残留污染;

  解决方法

  将洗涤缓冲液加入孔中洗涤,确保洗涤充分;  确保已在洗涤前弃掉所有残留溶液;  严格按照推荐的温度孵育;  勿在环境温度变化大的地方孵育;  严格按照相同的操作流程;  每一步均使用新的封板胶纸;

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