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可溶性CD40 ELISA酶联免疫试剂盒

简要描述:可溶性CD40 ELISA酶联免疫试剂盒本生生物公司供应:ELISA试剂盒,血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养,吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器。

  • 产品型号:
  • 产       地:天津市
  • 更新时间:2022-08-09
  • 访  问  量:240
详细介绍
品牌其他品牌产地国产
级别其他

  关键词:可溶性CD40 BUNSEN本生 酶联免疫试剂盒

  可溶性CD40 ELISA酶联免疫试剂盒


  实验原理:

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血清素/血清胺(ST)水平。用纯化的血清素/血清胺(ST)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST),再与HRP标记的血清素/血清胺(ST)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清素/血清胺(ST)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中血清素/血清胺(ST)浓度。

  标本要求:

  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  样本处理及要求:

  1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将zuzhijian碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

  4. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  试剂盒性能:

  1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

  2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

  3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

  保存条件及有效期:

  1.试剂盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6个月

  操作步骤:

  1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  80pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

  40pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

  20pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

  10pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

  5pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7.温育:操作同3。

  8.洗涤:操作同5。

  9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

  10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  可溶性CD40 ELISA酶联免疫试剂盒操作程序总结:

  


  计算:

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  注意事项:

  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4.请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

  5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6.底物请避光保存。

  7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

  9.本试剂不同批号组分不得混用。

 


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