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人促胰岛生长素(betatrophin)elisa试剂盒

简要描述:人促胰岛生长素(betatrophin)elisa试剂盒本生生物公司供应:ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器等。

  • 产品型号:BS-9940
  • 产       地:天津市
  • 更新时间:2023-05-22
  • 访  问  量:707
详细介绍
品牌其他品牌产地国产
级别其他规格48T/96T

  人促胰岛生长素(betatrophin)elisa试剂盒

  本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断

  本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人促胰岛生长素(betatrophin)的含量。

  有效期:6个月

  保存条件:2-8℃

  试剂盒组成:

  备注:

  1.(96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

  2.标准品浓度依次为:800、400、200、100、50、25 ng/L

  3.经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用ye将标本进行适当稀释后再进行实验。

  检测前准备工作:

  1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

  2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4℃

  3.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

  实验原理:

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人胰岛生长素(betatrophin)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胰岛生长素(betatrophin)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

  实验所需自备试验器材:

  1.酶标仪(450nm)

  2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3.37℃恒温箱

  4.蒸馏水或去离子水

  人促胰岛生长素(betatrophin)ELISA试剂盒样本处理及要求:

  1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织jian碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

  4.细胞培养物上清:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  5.其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。

  6.样品外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。

  7.样品保存:样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

  注意事项:

  1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

  2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

  3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

  4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

  5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

  6.在储存和温育时避免强光直接照射。

  7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

  8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

  9.不能使用过期产品。

  10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

  操作步骤:

  1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

  3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

  实验结果计算:

  绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

  人促胰岛生长素(betatrophin)ELISA试剂盒性能:

  1.检测范围:25 ng/L – 800 ng/L。

  2.灵敏度:检测浓度小于1.0 ng/L。

  3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

  4.重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

  技术小提示:

  1.当混合或重溶蛋白溶液时,尽量避免起沫。

  2.为了避免交叉感染,配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

  3.每次孵育时,请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

  4.混合后的显色底物在上板前应为无色,请避光保存;假如微孔板后,将由物色变成不同深度的蓝色。

  5.终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致;加入终止液后,孔内颜色由蓝变黄;若孔内有绿色,则表明孔内液体未混匀;请充分混合。

  人促胰岛生长素(betatrophin)elisa试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。



 


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