ELISA实验出现“花板”现象探讨

　　ELISA实验出现“花板"现象探讨

　　以下是ELISA实验出现“花板"现象的全面分析及解决方案，结合多个可信来源整理：

　　一、花板现象定义与表现‌

　　花板指实验中‌空白对照、阳性/阴性对照及质控孔结果正常‌，而‌样本孔OD值异常偏高‌(通常>2.0)，导致结果无梯度且背景升高‌。典型表现为整板呈均一黄色或淡黄色‌。

　　二、主要原因及解决方案‌

　　1. ‌样本因素‌

　　红细胞/纤维蛋白污染‌：未充分离心导致血红蛋白干扰(类过氧化物酶活性)‌。

　　→ ‌对策‌：3000rpm离心15min，确保血清清亮无沉淀‌。

　　内源性干扰物质‌：如细菌污染、溶血或抗生素残留‌。

　　→ ‌对策‌：避免溶血，使用无菌采集管，样本短期保存于4℃‌。

　　2. ‌操作问题‌

　　洗涤不充分‌：洗板次数不足(<3次)或洗液未注满孔‌。

　　→ ‌对策‌：严格按说明书洗涤(推荐5次)，洗液温度保持室温‌。

　　交叉污染‌：加样未换枪头或洗液溢出孔间‌。

　　→ ‌对策‌：每孔更换枪头，垂直拍板避免液体飞溅‌。

　　3. ‌试剂与设备问题‌

　　底物污染‌：TMB暴露于光或氧化剂中‌。

　　→ ‌对策‌：避光保存，现配现用，使用洁净容器配制‌。

　　孵育时间过长‌：非特异性吸附增加‌。

　　→ ‌对策‌：控制孵育时间(通常37℃ 30min)，大批量样本分批操作‌。

　　三、预防与优化建议‌

　　样本前处理‌

　　血清/血浆分离后静置1-2h再离心，避免纤维蛋白干扰‌。

　　避免使用叠氮钠防腐剂(HRP活性)‌。

　　标准化操作流程‌

　　加样前平衡试剂至室温(30min)，避免温度不均‌。

　　使用自动化设备减少人为误差(花板发生率可降低0.68%)‌。

　　质量控制‌

　　每批实验加入内参对照，监控非特异性吸附‌。

　　四、视频演示关键步骤‌

　　如需直观学习规范操作，可参考以下视频：

　　通过针对性优化上述环节，可显著降低花板发生率。若问题持续，需排查试剂批次或设备校准问题‌。

　　注：以上资料仅供参考，如需进一步了解产品详情，可参考品牌供应商或技术老师。

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