Elisa实验：从洗板到结果判读指南

　　Elisa实验：从洗板到结果判读指南

　　1. ‌洗板操作要点‌

　　洗涤液配制‌：使用含0.05% Tween-20的缓冲液，确保pH中性‌。

　　洗涤方法‌：每孔注满洗涤液后静置1分钟，重复3-5次，最后拍干孔内残留液体‌。

　　常见问题‌：洗涤不津会导致高背景，过度洗涤可能降低信号强度‌。

　　2. ‌显色与终止反应‌

　　显色控制‌：TMB底物避光孵育10-15分钟，显色梯度需肉眼可见(标准品孔由浅至深)‌。

　　终止时机‌：显色过深(如最高浓度孔OD>2.0)需提前终止，避免非线性响应‌。

　　3. ‌标准曲线与结果判读‌

　　曲线拟合‌：优先选择四参数逻辑(4-PL)拟合，要求R²>0.99‌。

　　浓度计算‌：样本OD值需落在标准曲线范围内，超出时需稀释重测‌。

　　质控标准‌：

　　复孔CV<15%‌;

　　质控品回收率80%-120%‌;

　　样本稀释线性验证(回收率80%-120%)‌。

　　4. ‌常见异常处理‌

　　高背景‌：优化封闭条件(如延长封闭时间至2小时)或降低抗体浓度‌。

　　无显色‌：检查试剂有效期、酶标物活性及操作步骤完整性‌。

　　曲线异常‌：验证标准品稀释准确性及移液器精度‌。

　　5. ‌结果表达方式‌

　　定性判定‌：S/Co值≥1为阳性(S=样本OD值，Co=cut-off值)。

　　半定量‌：通过抑制率(竞争法)或滴度(间接法)表示。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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