ELISA实验中常见的异常现象及解决方案

　　ELISA实验中常见的异常现象及解决方案

ELISA实验中常见的异常现象及解决方案如下：

一、显色异常

白板现象(全孔无显色)‌

可能原因：试剂过期/漏加关键组分(如底物、酶标记物)、酶失活、封闭不充分‌。

解决方案：检查试剂有效期及操作步骤，确保按顺序添加试剂;验证酶活性(如更换新批次底物)‌。

高背景/非特异性显色‌

现象：整板均一显色或阴性对照OD值过高。

原因：封闭不充分、洗涤不净、抗体浓度过高‌。

解决：优化封闭条件(延长封闭时间或更换封闭剂)、增加洗涤次数(含0.05% Tween-20的缓冲液)、滴定抗体浓度‌。

二、标准曲线异常

线性差(R²<0.99)‌

原因：标准品稀释错误、孔间污染、孵育温度不均‌。

解决：使用反向稀释法配制标准品，避免交叉污染，检查孵育设备稳定性‌。

灵敏度低‌

现象：标准品最高孔OD值<1.0。

可能原因：孵育时间不足、试剂未平衡至室温、洗板过度‌。

解决：延长孵育时间至30分钟以上，试剂使用前室温平衡20分钟，控制洗涤次数‌。

三、重复性差

孔间差异大(CV%>20%)‌

原因：加样误差、孵育条件不均(如叠放酶标板)、边缘效应‌。

解决：使用多通道移液器校准，避免叠放酶标板，弃用边缘孔或统一实验条件‌。

四、样本相关异常

样本孔不显色‌

可能原因：目标蛋白浓度低于检测限、样本基质干扰(如高盐、脂类)‌。

解决：稀释样本或更换高灵敏度试剂盒，排查样本保存条件(避免反复冻融)‌。

假阳性/假阴性‌

原因：样本含异嗜性抗体、溶血、细菌污染‌。

解决：使用封闭剂(如动物血清)预处理样本，确保样本采集规范‌。

五、设备与操作问题

酶标仪读数异常‌

现象：目测显色正常但读数偏低。

解决：检查滤光片匹配性、校准仪器参数‌。

以上异常需结合具体实验流程排查，建议设立内部质控对照(如阳性/阴性对照)以快速定位问题‌。

注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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