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品牌 | 其他品牌 | 产地 | 国产 |
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级别 | 其他 |
人瘦素(LEP) ELISA试剂盒的实验原理基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附技术,通过特异性抗体结合样本中的瘦素分子实现定量检测。以下是核心原理及关键步骤的详细说明:
BS-0083 人瘦素(LEP) ELISA试剂盒
一、检测原理
抗体包被
微孔板预先包被抗瘦素单克隆抗体(捕获抗体),可与样本中的瘦素特异性结合。
夹心复合物形成
样本中的瘦素与包被抗体结合后,加入标记的抗瘦素抗体(检测抗体),形成“抗体-抗原-酶标抗体"三明治结构。
信号放大与显色
通过链霉亲和素-HRP结合化抗体,催化底物TMB显色,颜色深浅与瘦素浓度成正比。
二、关键步骤
步骤 作用 注意事项
标准品梯度稀释 建立标准曲线(浓度范围通常为0-320pg/mL) 避免反复冻融,现配现用
洗涤 去除未结合抗体,减少背景干扰 拍干孔内液体,防止交叉污染
显色终止 2M硫酸终止反应,黄色产物在450nm波长检测 终止液需缓慢添加避免气泡
三、技术特点
灵敏度:常规型<10pg/mL,超敏型可达6.1pg/mL
特异性:双抗体设计(单抗+多抗)确保高亲和力结合
样本兼容性:适用于血清、血浆、细胞上清等,溶血/脂血样本需验证
四、干扰因素与优化建议
昼夜节律影响:瘦素水平在凌晨2:00达峰值,建议固定采血时间
样本处理:避免溶血,EDTA抗凝血浆检测结果稳定
试剂稳定性:HRP酶接触NaN3会失活,显色液需避光保存
注:具体操作需以试剂盒说明书为准,不同品牌抗体组合及检测范围可能存在差异。
注:以上资料仅供参考,如需进一步了解产品详情,可参考品牌供应商或技术老师。
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