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品牌 | 其他品牌 | 产地 | 国产 |
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级别 | 其他 | 规格 | 48T/96T |
小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒
小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中 C-反应蛋白(CRP)的含量。
一、产品说明
规格:96T、48T
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。
2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于 10%和 10% 。
检测范围:
7.5 ng/mL - 240 ng/mL
灵敏度:
最小低检测浓度小于 1.0 ng/mL
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存: 2-8℃。
2.有效期: 6 个月
二、实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠 C-反应蛋白(CRP)水平。用纯化的小鼠 C-反应蛋白(CRP)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入小鼠 C-反应蛋白(CRP),再与 HRP 标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经 过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠 C-反应蛋白(CRP)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠 C-反应蛋白(CRP)含量。
三、小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA检测试剂盒组成:
注:标准品浓度依次为:240、120、60、30、15、0 ng/mL.
四、样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收 集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次 离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过 程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液, 细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离 心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
五、操作步骤
1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 加酶:每孔加入酶标试剂 100μl,空白孔除外。
4. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
5. 配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
7. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟.
8. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
六、注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
注:本产品仅用于科研实验,凡购买本公司ELISA试剂盒的客户,均可享受免费的ELISA代测服务。详情可询我司在线客服和经理!
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